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中国农业大学牛病诊断与防治技术研究创新团队诚聘博士后
牛病 博士后 病毒激活 疫苗
2024/6/4
中国农业大学动物医学院预防兽医系吴文学、彭辰教授课题组因课题需要计划招聘博士后2名。课题组研究方向包括病毒激活或逃逸宿主天然免疫反应的机制、牛痘病毒载体疫苗研发、牛结节性皮肤病致病机制与防控技术开发等。课题组近5年以共同通讯或第一作者的研究成果可参见：PLoS Pathogens（2020），PNAS（2020，2016），Vaccines (2020，2021)，Transboundary an...
牦牛源牛凸隆病毒的检测及其基因组特征
牦牛 牛凸隆病毒 基因组 S基因重组
2021/3/5
本研究旨在证实青藏高原牦牛中牛凸隆病毒（bovine torovirus，BToV）的存在，并分析其基因组特征。采用RT-PCR方法检测西藏、青海、四川藏区的犊牦牛腹泻粪便中BToV，并扩增基因组。结果从145份样本中检出10份BToV阳性，平均阳性率约为6.9%，其中西藏、青海、四川藏区的阳性率分别约为11.8%、8.9%、3.0%。成功获得1个长为28 314 bp的牦牛源BToV基因组，GC...
本研究计划构建能同时表达牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）优势抗原基因的重组质粒并研究其免疫效果，旨在为BVD-IBR二联核酸疫苗的研制提供参考。采用PCR扩增目的基因E0及gD并将其依次连接至真核表达载体pVAX1-IRES中，构建pVAX1-E0-IRES-gD重组真核表达载体；将pVAX1-E0-IRES-gD转染至293T细胞中，间接免疫荧光法检测目的基因在细胞...
一株牛病毒性腹泻病毒BVDV-GSLY的分离鉴定
牛病毒性腹泻病毒 BVDV-GSYL株 分离 鉴定 进化分析
2021/4/7
为了解甘肃地区牛病毒性腹泻病毒的流行情况及其分子特征，通过RT-PCR方法对甘肃地区某规模化养牛场的牛腹泻粪便样品进行了BVDV鉴定。将鉴定为BVDV阳性的牛腹泻粪便样品处理后接种到牛肾传代细胞（MDBK）进行病毒的分离，并通过RT-PCR、免疫荧光检测及病毒基因序列测定对分离的病毒进行鉴定及遗传进化分析。结果表明，成功分离到一株牛源BVDV，命名为BVDV-GSLY株；BVDV-GSLY毒株接种...
本试验的目的是建立更加灵敏的检测牛冠状病毒（BCoV）的RT-PCR方法，并对川西北草原牦牛病料进行BCoV病原检测。选择BCoV聚合酶基因Nsp7-Nsp9片段设计引物，通过反应条件和体系优化，建立检测BCoV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。结果显示：所建方法特异性和重复性好，灵敏性达到1×10-2 pg·μL-1；该方法对肉牛和牦牛BCoV都有良好的检测效果，优于比较的两种以BCoV ...
不同来源的3株牛病毒性腹泻病毒对小鼠的致病性分析
牛病毒性腹泻病毒 致病性 BALB/c小鼠 感染
2019/1/16
为分析牛病毒性腹泻病毒（BVDV）对小鼠的致病性，选取BALB/c小鼠为试验动物，攻毒组通过腹腔注射接种不同来源的3株牦牛源BVDV1-DJ2、BVDV1-Z6和OregonC24V毒株，对照组接种DMEM培养基。分别于接种后第5、7、10天收集小鼠血液和组织，并通过血常规、病理组织学、荧光定量PCR等方法对病毒感染小鼠的致病性进行研究。结果显示：攻毒后，Z6组小鼠表现的临床症状较DJ2组严重；攻...
牛流行热病毒分离株HN1/2012的全基因组序列测定及演化分析
牛流行热病毒 全基因组序列 演化分析
2019/1/16
旨在解析我国牛流行热病毒（BEFV）分离株HN1/2012的基因组特征，为阐明我国BEFV毒株的演化规律提供数据。根据GenBank中收录的BEFV毒株的全基因组信息，设计引物，以RT-PCR扩增11段相互部分重叠的DNA片段，克隆至pGEM T-easy载体，分别进行测序，利用DNAStar软件进行序列拼接获得HN1/2012株的全基因组序列。根据BEFV编码基因的转录起始（TI）和转录终止/多...
腺病毒载体介导Smad3基因在秦川牛前体脂肪细胞中的过表达和沉默
秦川牛 Smad3基因 前体脂肪细胞 腺病毒载体
2019/1/15
旨在通过在秦川牛前体脂肪细胞中过表达和沉默Smad3基因，探讨其在秦川牛前体脂肪细胞分化过程中的生物学功能，从而为阐明TGF-β信号通路在牛脂肪组织生长发育过程中发挥的作用提供理论依据。本试验采用Ad5腺病毒改建的AdMaxTM重组腺病毒包装系统成功重组获得了过表达腺病毒pDC316-EGFP-bSMAD3和干扰腺病毒pDC316-EGFP-ShRNA-bSMAD3-1405。感染牛前体脂肪细胞后...
为探讨诃子、矮紫堇、甘青乌头3种藏药的体外抗牛病毒性腹泻病毒（BVDV）作用效果，利用细胞培养技术，对BVDV进行增殖并检测TCID50；通过CPE观察和CCK8检测相结合的方法测定3种藏药和利巴韦林的最大药物安全浓度和药物半数中毒浓度（CC50）；采用先加药后加病毒、先加病毒后加药、药和病毒预先作用的3种不同加药方式进行体外抗病毒抑制试验，计算不同作用方式下抗病毒有效率、药物半数有效浓度（EC5...
旨在探究BVDV感染对牛外周血来源的树突状细胞成熟及Th1和Th2型细胞因子分泌水平的影响，进一步揭示BVDV感染对机体免疫机能的影响机制。从牛外周血分离单核细胞，诱导培养为树突状细胞后接种BVDV共培养，采用显微镜观察细胞的形态，流式细胞术分析细胞表面标志分子，半定量RT-PCR法检测Th1型细胞因子IL-12p40和Th2型细胞因子IL-10的mRNA转录水平。结果显示，获得形态及表型典型的树...
细胞自噬对牛病毒性腹泻病毒复制的影响
牛病毒性腹泻病毒 细胞自噬 病毒复制
2015/7/28
本研究旨在了解牛病毒性腹泻病毒(BVDV)诱导的细胞自噬在病毒感染过程中所起的作用。用Oregon C24V株感染MDBK细胞，以Western blot、间接免疫荧光、透射电镜三种方法鉴定细胞自噬的产生；通过自噬抑制药物Wortmannin和自噬基因Beclin-1的RNAi干扰阻断自噬，探究自噬对BVDV复制的影响。结果显示，病毒感染可以引起LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化及p62的降解；转染GFP-...
牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究
牛肠道病毒2型 单克隆抗体 夹心ELISA
2015/12/2
旨在制备牛肠道病毒2型（BEV-2）单克隆抗体，建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2 VP1+重组蛋白质接种BALB/c小鼠，取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合，对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2 VP1+蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1G1、5G6）。用制备的单克隆抗体包被酶标板，通过一系列的优化，建立了BEV-2双抗夹心EL...
牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E2基因在卡介苗中的优化表达
牛病毒性腹泻－黏膜病病毒 E2基因 卡介苗 优化表达
2014/3/18
为构建牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（BVDV）基因工程活载体疫苗，根据已知的BVDV Changchun184毒株E2基因序列，利用DNAStar生物学软件对其进行分析，预测了可能存在的抗原表位，设计6对引物，分别扩增了包含预测抗原位点的6个片段，1—297 aa、1—345 aa、1—374 aa、45—297 aa、45—345 aa和45—374 aa，克隆至穿梭表达载体pMV361中，经酶切、...
牛狂犬病病毒的鉴定及N基因序列分析
牛 狂犬病毒 分离鉴定 分子特征分析
2013/11/29
为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征，本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象，运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因（N基因）RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定，使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗传进化关系。内基氏小体检测、荧光抗体试验、乳鼠脑内接种试验和特异性目的基因扩增结果显示狂犬病毒阳性，建立了基于狂犬病毒N基因的遗传进化关系树。结合临床症状确诊...
猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立
荧光定量 猪源牛病毒性腹泻病毒 猪瘟病毒 猪繁殖 呼吸综合征
2013/12/3
本研究旨在建立一种荧光定量PCR检测方法，用于猪源牛病毒性腹泻病毒（BVDVs）检测，同时能鉴别诊断猪瘟病毒（CSFV）。根据BVDVs与CSFV 5′-UTR保守序列，设计一套引物和特异TaqMan探针，以本实验室构建的猪源BVDVs 5′-UTR阳性重组质粒为标准品，通过优化反应条件，建立了标准曲线。以构建的标准品为模板进行了特异性、敏感性、重复性试验、并应用于临床检测。结果显示，该方法检测C...