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本研究旨在建立牛IFN-γ体外释放法，为牛结核病的免疫学诊断提供一种快速、有效的新检测技术。分别以获得的牛IFN-γ单克隆抗体Bo-mAb1作为捕获抗体，以Bo-mAb2H作为检测抗体，建立了基于双抗体夹心ELISA（DAS-ELISA）的牛IFN-γ体外释放法。该方法的最低检出限为3.12 ng•mL－1，可特异性检测出重组牛IFN-γ（Bac-BoIFN-γ）及天然BoIFN-γ，...
基于重组Erns蛋白的猪瘟ErnsELISA的建立和优化
猪瘟 Erns-ELISA 鉴别诊断
2013/12/11
将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原，建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验，确定了最适抗原包被量为0.15 μg；血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明，建立的Erns-ELISA简便、特异、稳定，与基于重组E2蛋白的E2-ELISA的符合率高达96.7%，与基于全病毒抗原的Dot-ELISA符合率为77.5%。可以用于猪瘟...
原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M)，并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法，与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和NotⅠ酶切位点，经RT-PCR扩增得到目的基因，连接pCR®2.1载体，构建重组质粒pCR-RV-M，重组质粒用SmaⅠ和NotⅠ进行双酶...
重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究
刚地弓形虫 rMIC3 ELISA 检测
2010/1/7
［目的］探讨检测猪弓形虫病的新方法。［方法］应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3（rMIC3）作为包被抗原建立间接ELISA 方法，用于猪弓形虫抗体的检测。［结果］该法所用最佳抗原浓度为3.40 μg/ml，最适宜的血清稀释倍数为1〖DK〗∶160，与猪瘟病毒等阳性血清不发生交叉反应，与LAT的符合率为92.56%。［结论］该方法快速、特异、重复性好，可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。
口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒
口蹄疫 ELISA诊断试剂盒
2008/11/21
试剂盒关键技术包括：口蹄疫3A基因的RT-PCR扩增；口蹄疫3ABC基因的克隆及序列分析；口蹄疫3A蛋白基因重组表达质粒构建；口蹄疫3A蛋白基因在大肠杆菌中表达等。该试剂盒具有较好的特异性、灵敏性、稳定性，可以区分口蹄疫病毒感染抗体和疫苗免疫抗体，具有较好的应用前景。
该成果首次对牛结核分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白（Mce4 E）和牛结核分枝杆菌复苏因子C进行体外重组表达，并应用于牛结核分枝杆菌诊断抗原的研究，同时我们也对牛结核分枝杆菌优势血清蛋白MPB83进行了研究，创造性的将三种重组融合蛋白进行抗原包被，建立了牛结核病间接ELISA诊断方法，大大的提高了ELISA诊断试剂盒的特异性和敏感性，从而兼顾快速、便捷的同时增加了诊断的可靠性。
兔出血症重组抗原间接ELISA试剂盒研制及应用
兔 出血症 重组抗原间接ELISA试剂盒
2008/10/16
RHDV属杯状病毒科，VP60蛋白是其唯一的结构蛋白，也是免疫原性蛋白。在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达的VP60蛋白可以自我组装成病毒样颗粒（virus-like particles，VLPs），其在结构、免疫原性和抗原性上与自然病毒颗粒十分相似，采用生物技术手段，利用现有资源，将昆虫细胞中表达的重组VP60蛋白作为诊断抗原，建立间接ELISA检测方法，筛选反应试剂，优化反应条件，组装试剂盒，满足...
奶牛结核病间接ELISA检测方法的研究
结核病 奶牛 ELISA重组 多抗原
2008/10/8
该项目属于应用技术研究领域，适用于由牛分枝杆菌和结核分枝杆菌引起的动物结核病的快速检测。该研究利用spliced by overlap extension (SOE)技术，PCR扩增牛分枝杆菌抗原mpb70、mpb83和esat-6的三串联基因mpb70-83-e6，分子克隆和重组表达了融合蛋白M70-83-E6，并以此作为诊断抗原，通过对ELISA各项反应条件的优化，建立了特异、敏感的间接ELI...
应用BA－ELISA法检测结核病牛血清中抗体的研究
牛 血清结核病 BA-ELISA法
2008/9/10
本研究课题通过引入生物素－亲和素－酶复合物酶联免疫吸附试验，检测牛血清中结核抗体存在情况，为进一步研究结核病病理及找新的敏感性高、特异性强、节省人力、物力的诊断方法提供依据。试验总结了前人的经验，用295头份牛血清，进行了BA－ELISA、ELISA检测，并进行了特异性、稳定性等对比试验，结蜾表明BA－ELISA法优于ELISA法和PPD皮变反应。可作为目前广泛应用的PPD皮变反应的辅助诊断方法。...
猪繁殖与呼吸综合征ELISA诊断试剂盒的研究
试剂盒 ELISA猪 繁殖与呼吸综合征 N蛋白表达抗原
2008/8/1
新产品知识产权形式：项目合作方式：技术服务成果完成单位：中国动物卫生与流行病学中心成果摘要： 该课题为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)间接ELISA试剂盒的研发。该课题通过克隆了PRRSV核衣壳蛋白基因，与野生型杆状病毒共转染sf9细胞表达了PRRSV蛋白质；对重组杆状病毒在大批量生产工艺方面进行了研究，证明重组杆状病毒非常稳定。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原，对各种条件进行优化，建立了检测PRR...