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牛胎儿骨骼肌来源成肌细胞分化相关microRNA的筛查与鉴定
牛 胎儿骨骼肌 miRNA 成肌细胞分化
2018/6/26
旨在发掘牛胎儿骨骼肌来源的成肌细胞分化过程中差异表达的miRNA，为进一步研究牛胎儿期成肌细胞分化的分子机理提供理论基础。本研究体外培养3头4月龄的牛胎儿骨骼肌来源的成肌细胞，运用高通量测序技术对成肌细胞分化起始和终末两个不同时期进行miRNA测序，并对测序结果进行生物信息学分析，鉴定差异表达的miRNA。随机选取差异表达miRNA，进行荧光定量PCR验证。结果表明，本研究从6个测序文库中共鉴定出...
转乳铁蛋白肽和α干扰素基因的牛胎儿成纤维细胞的制备
乳铁蛋白肽 α干扰素 转基因 牛胎儿成纤维细胞
2013/12/2
旨在构建含有乳铁蛋白肽基因和α干扰素基因的载体，并制备转基因牛胎儿成纤维细胞，为研制抗乳房炎和口蹄疫转基因克隆牛提供供体细胞。本研究构建了由山羊β-酪蛋白启动子启动的牛乳铁蛋白肽基因和由CMV启动子调控的人α干扰素基因的载体，以EGFP基因作为报告基因， neo基因作为筛选基因；分别采用脂质体和电击法转染牛胎儿成纤维细胞， G418筛选得到转基因阳性细胞，并用PCR方法检测转基因细胞中目的基因的整...
为了为核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞，体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞，线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染牛胎儿成纤维细胞，通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆，PCR 鉴定外源基因在细胞基因组中的整合，对阳性克隆进行传代2-3次后利用RT-PCR检测外源基因的转录。...
为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染。克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体。用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24h后观察荧光...