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为研究Akt基因在中华绒螯蟹蜕壳前后肌肉生长过程中的功能，应用RACE技术克隆得到编码中华绒螯蟹Akt(命名为EsAkt)的全长为2 200 bp的cDNA序列，包括159 bp的5'非翻译区(5'-UTR)、496 bp的3'非翻译区(3'-UTR)和长度为1545 bp编码514个氨基酸的编码序列。蛋白质结构域分析显示EsAkt含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的3个特征性保守结构域。多序列比对和...
在已知中国美利奴羊MHC(Major histocompatibility complex)区段BAC(Bacterial artificial chromosome)克隆序列信息和预测的基因注释前提下, 用位于中国美利奴羊基因组BAC文库MHC区段的6个BAC克隆酶切片段为探针, 以噬菌斑原位杂交筛选法筛选中国美利奴羊混合组织cDNA文库(库库杂交), 对分离到的cDNA阳性克隆进行全序列测定,...
灰飞虱高带毒（RSV）群体酵母双杂交cDNA文库的构建
灰飞虱 水稻条纹病毒 同源重组 cDNA文库 酵母双杂交cDNA文库
2011/12/29
为了研究灰飞虱Laodelphax striatellus Fallén与水稻条纹病毒（rice stripe virus, RSV）互作机制， 本研究构建了灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库。以实验室筛选的灰飞虱高带毒群体为材料， 分离纯化mRNA， 反转录合成双链cDNA， 并连接三框型接头， 层析柱分级纯化。采用同源重组反应制备三框型cDNA入门文库， 再通过同源重组将入门文库转移到Ga...
半滑舌鳎FTZ-F1 cDNA克隆及表达分析(英文）
半滑舌鳎 FTZ-F1 cDNA克隆 表达
2009/6/25
为研究性别相关基因FTZ-F1在半滑舌鳎鱼中的表达特征，采用同源克隆策略,从其精巢分离了3 143 bp长的半滑舌鳎FTZ-F1（hsFTZ-F1）的全长cDNA，该序列包含1 458 bp开放阅读框，66 bp长的5’末端非编码区（UTR），1 619 bp长的3’末端UTR。mRNA的组织分布、氨基酸序列和系统发生分析表明：hsFTZ-F1属于SF-1/Ad4BP类群。RT-PCR分析表明：h...
半滑舌鳎脑芳香化酶基因cDNA克隆及表达分析
半滑舌鳎 芳香化酶 cDNA克隆 表达
2009/6/25
为研究脑型芳香化酶（P450aromB）在半滑舌鳎性别分化中的作用，采用同源克隆策略,从半滑舌鳎脑分离了2184 bp长的脑型芳香化酶的全长cDNA，该基因编码498个氨基酸。氨基酸序列和系统发育分析表明，P450aromB属于脑型P450arom，P450aromB的氨基酸序列与其他鱼类脑型Ｐ450arom的同源性较高（48.3%—66.1%），与性腺型Ｐ450arom的同源性较低(34.2%—...
利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库
非洲爪蟾 酵母双杂交 随机引物 定向cDNA文库
2009/6/23
描述了一种新的构建cDNA文库的方法，其中用来合成cDNA第一链的随机引物5′-端被加上碱基d（AC），在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d（GTCG）。在cDNA双链3′-端，连接子连接上后会形成一个完整的SalI酶切位点d（GTCGAC），而在5′-端几乎不会形成SalI位点。在SalI酶切后利用形成的3′-粘性末端与5′-EcoRI粘性末端一起将cDNA双链定向导入线性化的质粒...
本项研究以雌性草鱼肠道为实验材料，采用非均一化的Oligo—dT引物定向克隆技术构建了草鱼肠道组织的
cDNA文库，对文库质量的分析结果表明：cDNA文库的库容量至少为2．3×lo5，重组率达95％ ，平均插入片断长度
大于1000bp。挑取cDNA克隆进行5’端测序，总共进行了1571个成功反应，其中l4ll条ESTs长度大于100bp，初步
拼接得到939个单基因簇(Unigene)，其...
大海马垂体糖蛋白激素α亚基的cDNA克隆和序列分析
大海马 糖蛋白激素a亚基 eDNA克隆
2009/6/3
大海马(Hippocampus kuda Bleeker)隶属鱼纲海龙目，是一种名贵的海产中药材，也是重要的海洋保护鱼类。我
们通过快速扩增eDNA末端(rapid amplification of eDNA ends，RACE)的方法，首次从大海马的垂体总RNA中扩增出其
垂体糖蛋白激素a亚基(pituitary glyeoprotein hormone a subunit，PGH a)全长...
团头鲂促性腺激素β亚基cDNA的克隆和序列分析
RT—PCR RACE 克隆 团头鲂 促性腺激素B亚基cDNA
2009/6/2
本研究利用RT—PCR和RACE克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)脑下垂体中两种促性腺激素B亚基
(GtH Ip和GtH IIp)cDNA序列，并对其进行了结构和系统进化分析。团头鲂GtH Ip亚基cDNA全长567碱基对
(bp)，5’端非翻译区26bp；3’端非翻译区148bp；开放阅读框(ORF)393bp，其编码含有130个氨基酸的蛋白质，包括
由108...
应用cDNA芯片分析79个新基因的人胚组织表达谱
cDNA芯片 新基因 表达序列标签（EST） 差异表达RNA分析
2008/6/12
大规模cDNA测序和生物信息学技术相结合，得到来自于商品化的人胚肾cDNA文库79个代表新基因的表达序列标签(EST).随后，采用高速度机械手制备这些cDNA的基因芯片，用于鉴定79个新基因的ESTs在20周、26周两个胚胎时期6种组织中的基因表达状况，以研究这些EST片段代表的新基因功能提供线索.通过芯片杂交及结果分析，得到同一个组织两个不同时相8个差异表达的基因，随后的RNA印迹分析的...
用cDNA表达阵谱分析小鼠鼻咽部相对特异表达基因
基因表达谱 鼻咽 相对组织特异性基因
2008/6/12
利用Mouse AtlasTM cDNA expression array检测鼻咽、气管、食管、膀胱四种组织中588个已知基因的表达谱，得到11个在鼻咽上皮中表达相对较高的基因，作为鼻咽部组织相对特异基因的候选者，并用RT-PCR进一步验证.
cDNA文库构建和筛选是基因克隆的重要方法之一，它是目前发现新基因和研 究基因功能的基本工具。从cDNA文库中可以筛选到目的基因，并直接用于该基因的表达。经典 cDNA文库存在克隆的片段短等缺点，而全长cDNA文库则能提供完整的mRNA信息，从而克隆cDNA全长；对文库进行均一化处理即均一化cDNA文库，可以增加克隆低丰度mRNA的机会；差减cDNA文库在研究生物体某一时期基因差异表达上具有重要的...
鸡下丘脑cDNA文库的构建及部分克隆ESTs序列初步分析
鸡 下丘脑 cDNA文库 表达序列标签
2008/2/5
摘要以鸡下丘脑为实验材料，以λgt10为载体，构建了鸡下丘脑cDNA文库。结果表明，文库的滴度为3.8×106，重组率为80％，插入片段大小集中在1.0～3.0kb之间。从cDNA文库中随机挑取10个克隆，并对其ESTs进行了测定和初步分析。经BLASTn和FASTA3分析后发现，4个ESTs在鸡中已有同源序列，4个在人或其他物种中也可以找到同源序列，有两个为未知功能基因。所测10个ESTs序列均...
一个小鼠未分化胚胎癌细胞特异cDNA的分子克隆
胚胎癌细胞分子克隆
2008/2/3
摘要用胚胎癌细胞株(EC)PCC3的poly(A)+RNA及质粒pBR322在大肠杆菌中建立了一个cDNA文库。 用另一株EC细胞F9及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM1的32PcDNA作探针，对P CC3 cDNA文库作了差别筛选。自3，000个cDNA克隆中筛出25个克隆。其中1个克隆MS3含有长 250bp的cDNA。用MS3 cDNA作探针，在F9细胞中能检出1个占poly(...